表1. 胶原酶NB系列产品选择指南

Collagenase NB 1 Premium Grade

Collagenase NB 4 Standard Grade

Collagenase NB 4G Proved Grade

Collagenase NB 5 Sterile Grade

Collagenase NB 8 Broad Range

缩写

NB 1

NB 4

NB 4G

NB 5

NB 8

货号

17455

17454

17465

17459

17456

简单描述

高度纯化胶原酶，含胶原酶Class I和Class II型，以及非常低的蛋白裂解酶次活性和细菌内毒素。

粗制酶，含胶原酶Class I和Class II型，以及平衡比的蛋白水解酶次活性比如中性蛋白酶或梭菌蛋白酶。

粗制酶，与胶原酶NB 4标准级别相比，具有更高的胶原酶活性，具有更平衡的中性蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶样活性。

粗制酶，含与胶原酶NB 4标准级别相同的酶活性。不同之处在于根据欧洲药典EP规定的无菌条件下生产。

纯化胶原酶，含有增加的胶原酶活性和减低的蛋白水解酶次活性和细菌内毒素。

纯化程度

亲和高度纯化酶

粗制酶

粗制酶

粗制酶

纯化酶

胶原酶活性

++++

+

++

+

+++

蛋白裂解次活性

-

++

+++

+++

+

无菌程度

非无菌

非无菌

非无菌

无菌

非无菌

比活力

≥3.00 U/mg

≥0.10 U/mg

≥0.18 U/mg

≥0.10 U/mg

≥0.90 U/mg

内毒素

≤10.0 EU/mg

/

/

/

≤100 EU/mg

主要应用

用于分离敏感细胞并保证高产量和高活性。与中性蛋白酶NB联合使用，特别适用于不同物种如人或猪来源的郎格罕氏岛（胰岛）分离。

适用于温和和有效分离各种来源的细胞。比如，分离人和啮齿类动物肝细胞，软骨细胞，神经和内皮细胞，成纤维细胞，脂肪细胞，干细胞和啮齿类动物成骨细胞。

适用于广谱的细胞类型分离，特别是成纤维细胞、人和啮齿类动物肝细胞、青蛙卵母细胞和上皮细胞。

适用于温和和有效分离各种来源的细胞。比如，分离人和啮齿类动物肝细胞，软骨细胞，神经和内皮细胞，成纤维细胞，脂肪细胞，干细胞和啮齿类动物成骨细胞。

适用于广泛来源组织的消化用途比如啮齿类动物的郎格罕氏岛（胰岛）分离，人心肌细胞，肿瘤细胞，肌肉细胞，成骨细胞和猪肝脏细胞。

基本描述

粗制酶，含胶原酶Class I和Class II型，以及平衡比的蛋白水解酶次活性比如中性蛋白酶或梭菌蛋白酶。

同义名

Collagenase NB 4 Standard Grade from Clostridium histolyticum; Clostridiopeptidase A;

EC NO.

EC 3.4.24.3

CAS NO.

9001-12-1

分子量

Mr ca. 70 000 - 120 000 (collagenases)

活力

PZ activity (Wünsch):≥0.10 U/mg

单位定义

1 U according to Wünsch (2) catalyzes the hydrolysis of 1 μmole 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-leucylglycyl-L-prolyl-D-arginine per minute at 25 °C, pH 7.1.

应用

适用于温和和有效分离各种来源的细胞。比如，分离人和啮齿类动物肝细胞，软骨细胞，神经和内皮细胞，成纤维细胞，脂肪细胞，干细胞和啮齿类动物成骨细胞。

Suitable for different applications in tissue dissociation such as isolation of human and rodent hepatocytes, chondrocytes, neuronal and endothelial cells, fibroblasts, cells from adipose tissue (e.g. ADSCs), stem cells and rodent osteoblasts.

品牌              

名称

货号                   

规格                  

SERVA

Collagenase NB 4 Standard Grade 胶原酶NB 4（标准级别）      

17454.02

500mg

SERVA

Collagenase NB 4 Standard Grade 胶原酶NB 4（标准级别）

17454.01

1g

问：胶原酶NB（Collagenase NB）和中性蛋白酶NB（Neutral Protease NB）的来源是什么？

答：SERVA公司所有胶原酶NB和中性蛋白酶NB产品都来源自溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），其是一种厌氧、革兰氏阳性菌，天然代谢产生胶原酶和中性蛋白酶。

问：为什么胶原酶NB1和中性蛋白酶NB根据活力值来包装，而所有其他胶原酶NB产品按照质量来包装？

答：胶原酶NB1和中性蛋白酶NB特别适合用来分离人胰腺来源的郎格罕氏岛（胰岛），这些酶的包装大小特别设计用于消化一个人胰腺。而其他胶原酶NB产品适合各种应用所以很难确定特定包装大小。

问：如何保存胶原酶NB和中性蛋白酶NB？

答：SERVA公司胶原酶NB和中性蛋白酶NB产品以冻干粉形式提供，应置于2-8℃干燥保存（除非COA上特别说明）。在此条件下，产品在COA上注明的有效日期前都是稳定的。避免重复的开/关瓶子。

问：是否应该重溶胶原酶NB和分装储存液或每次按需称取冻干粉产品？

答：SERVA公司推荐制备储存液，通过将胶原酶NB溶解在适当体积的缓冲液，如HBSS，PBS，Tris或Ringer溶液中。重溶储存液需过滤除菌（如果产品本身非无菌），分装，冻存在-20℃。内部稳定性测试显示如此条件下能保存1年，避免重复冻融。

如果冻干粉产品的瓶子开关数次，会使得粉末酶接触空气湿气，可能引起酶活性降低。

问：是否可以过滤胶原酶NB和中性蛋白酶NB溶液？

答：是的，这些溶液都能经0.22μm滤膜除菌。建议使用低蛋白结合特性的滤器（滤膜），比如醋酸纤维素膜，PVDF或PES。

问：加酶到细胞之前如何保存胶原酶溶液？

答：胶原酶NB和中性蛋白酶NB溶液需要持续性保存在冰上直至使用，因保存在更高温度时酶活力降低很明显。总而言之，尽快使用酶溶液。

问：胶原酶NB和中性蛋白酶的最佳工作温度和最佳pH？

答：胶原酶NB的最佳工作温度37℃，最佳pH=7.4；中性蛋白酶的最佳温度37℃，中性pH皆可；

问：是否能提供关于细胞分离应用的操作步骤？

答：SERVA胶原酶NB应用范围非常广，且使用实验室非常多。SERVA提供应用注意事项和关于各种组织来源的细胞分离所用的胶原酶浓度和消化时间的步骤信息。见官网：Application details for tissue dissociation。

问：哪种缓冲液应用于细胞分离？

答：不推荐使用特别的缓冲液，因已知几种缓冲液，包括HBSS，PBS和Tris都适用于胶原酶的细胞分离。胶原酶依赖Ca2+，因此推荐缓冲液含≥2mM Ca2+。EDTA会抑制胶原酶活性，因此缓冲液中必须完全不含钙离子螯合剂比如EDTA。

问：如何终止酶的消化反应？

答：通过降低温度、添加人或胎牛血清，稀释或清洗掉消化液都能终止消化反应。没有特别推荐因几种方法都有效，还是取决于组织和细胞类型和具体应用。

问：如何换算胶原酶单位？

答：SERVA states collagenase activity in PZ units according to Wünsch:1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg，1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl or CDU/mg，1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg

更多产品问题请自行登录SERVA官网或来电索取，021-54736159，QQ：2971634497。