Rhodamine Phalloidin罗丹明标记鬼笔环肽

(Cytoskeleton Inc. PHDR1）

产品标签

Phalloidin 鬼笔环肽；Actin-Stain^TM 488 Phalloidin；F-actin 肌动蛋白（聚合）；Actin filaments 肌动蛋白丝；Cytochalasin细胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4；

基本描述

鬼笔环肽（Phalloidin），又称鬼笔鹅膏素，是从毒蘑菇鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）中分离到的一种七氨基酸多肽毒素，以极高亲和力和特异性结合肌动蛋白丝F-actin（聚合形式的肌动蛋白）（Kd=20nM）。鬼笔环肽将肌动蛋白聚合的临界浓度降至≤1μg/ml，从而用作一种聚合增强剂。荧光探针标记的鬼笔环肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能对组织培养细胞、组织切片和无细胞制备物进行肌动纤维丝染色。经鬼笔环肽标记的肌动纤维丝仍能维持标记前的许多功能特征包括能够与肌球蛋白相互作用。

产品应用

1. [Stain F-actin in fixed cells]; 对固定的组织切片和组织细胞培养物进行聚合形式肌动蛋白的荧光染色；

2. [Stabilize actin filaments in vitro] 体外稳定肌动蛋白丝；

3. [Visualize actin filaments in vitro] 体外可视化肌动蛋白丝；

鬼笔环肽（Phalloidin）用作实验室研究工具的方法得到良好的阐述和验证，归功于其能抑制微丝去聚合（Microfilament depolymerization）的能力。由此，经Phalloidin稳定的微丝能用作底物来鉴定和归类逐渐增加的微丝相关蛋白。另外，罗丹明标记的鬼笔环肽（Rhodamine Phalloidin）能用来对细胞肌动蛋白骨架进行染色，以及细胞运动实验中用作微丝的荧光标志物/稳定剂。

产品特征

1. 外观：粉末冻干粉；

2. 纯度：>99%

3. 分子量：1306

4. 保存：冻干粉4℃干燥保存1年有效；储存液-20℃避光保存半年有效；

5. 重溶方法：使用前简单离心使得产品都降至管底，加入500μl 100%甲醇充分溶解后配置成14μM储存液。建议按照10×50μl分装，-20℃避光保存，稳定保存6个月。

6. 生物活性：本品的肌动蛋白丝稳定活性（Microfilament stabilizing property）相当于或更优于其他商业化同类型鬼笔环肽产品。用70nM Phalloidin标记的肌动蛋白丝室温超过1周稳定保存。

应用实例

Fig 1.  罗丹明鬼笔环肽（Cytoskeleton, PHDR1）染色下的Swiss 3T3成纤维细胞。A Swiss 3T3 fibroblast stained with rhodamine phalloidin (PHDR1). The phalloidin binds specifically to F-actin and does therefore stain the actin stress fibers in the cell

使用方法【仅作参考】：

1. 免疫荧光（Immunofluorescence）

需要材料：1）Rhodamine Phalloidin（PHDR1）；2）盖玻片爬片生长达到半汇合的Swiss 3T3细胞；3）PBS buffer；4）固定剂；5）破膜剂；7）抗荧光淬灭封片剂；8）100nM DAPI in PBS；11）载玻片；12）盖玻片封固液（透明指甲油）；

操作流程：咨询我司工作人员或详见说明书。

2. 制备稳定的荧光标记肌动蛋白丝（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

体外肌动蛋白运动试验（in vitro motility assays），稳定的荧光标记肌动蛋白丝是研究肌球马达蛋白非常优秀的底物材料。Rhodamine phalloidin结合对肌球蛋白ATPase的肌动蛋白激活无影响。

需要材料：1）肌动蛋白Actin protein（#AKL99-A）；2）通用肌动蛋白缓冲液General Actin buffer（#BSA01）；3）10×聚合缓冲液Polymerization buffer（#BSA02）；4）Rhodamine phalloidin（PHDR1）；

操作流程：

 1. 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌动蛋白缓冲液来重悬兔肌肉肌动蛋白（rabbit muscle actin，#AKL99-A），使其浓度为1mg/ml。

2. 加入1/10体积的聚合缓冲液来聚合肌动蛋白，室温孵育1h。

3. 用含70nM rhodamine phalloidin的聚合缓冲液按照1:100的比例稀释聚合的肌动蛋白丝。

4. 吸取1ul标记好的肌动蛋白滴在已滴有一滴抗荧光淬灭剂的载玻片上。

5. 取一干净盖玻片盖在液滴处，用纸巾吸掉多余液体。

6. 荧光显微镜观察荧光纤维。肌动蛋白丝平均长度为5-40um，在4℃避光能稳定保存1周。

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【说明A】：本品500ul约可做300-350张细胞爬片；

【说明B】：若想保持优异的染色结果，又受成本所限制，强力推荐使用我司MKbio的同类型产品TRITC-Phalloidin（# MX4405-300T），绝对进口品牌，经实验室和客户的双重验证，染色优异，价格实惠，仅568元/300T，欢迎咨询和订购。电话：021-54736159，QQ：2971634497。

【提示A】：见我司整理的MKbio鬼笔环肽及衍生物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）产品专题。

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引用文献（#PHDR1）：

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