Deoxyribonuclease I (DNase I) 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺

（冻干粉形式，即用型液体形式，懋康生物）

关键词：

脱氧核糖核酸酶I DNase I；核糖核酸酶 RNase；全能核酸酶 Benzonase；Sigma D5025； Sigma DN25；CAS：9003-98-9；

需求背景：

分子生物学实验中，在RNA样品的制备过程中，常?；崾艿窖分胁豢杀苊獯嬖诘腄NA的干扰，为了保证RNA样品的纯度以及满足后续RNA相关研究的顺利开展，需要DNase I有针对性的酶解DNA。另外，在蛋白制品的生产中比如抗体，重组蛋白，细胞裂解这步释放的内含物中除掉蛋白外，往往有很高含量的核酸（DNA, RNA），核酸的存在严重干扰制品的纯化和活性，为此，利用DNase I和RNase组合方式来去除核酸干扰，也很必要?；褂?，在其他的实验比如TUNEL细胞凋亡检测中常用DNase I对细胞样本核酸进行剪切，以得到实验所需的阳性对照。

基本介绍：

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸（见下图反应流程图），平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I可水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。

脱氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，缩写DNase I，最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是最主要的来源之一。DNase I以两对二硫键结合的多种糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范围是pH 7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可?；っ甘蛊洳槐凰?，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原来的1/2。

主要应用：

◇   制备不含DNA的RNA样本；

◇   RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除；

◇   DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白质相互作用；

◇   缺口平移法标记探针用；

◇   制备随机DNA片段文库；

◇   TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照；

我司（懋康生物MKBio）提供的脱氧核糖核酸酶I（DNase I），来源于牛胰腺，通过亲和色谱纯化所得，不含RNase和蛋白酶污染。为了满足工业用户和科研用户的不同应用需求，我们提供冻干粉（不同比活）和即用型液体形式的DNase I。具体信息如下：

一、脱氧核糖核酸酶I（DNase I）（冻干粉形式，比活力≥2000 Kunit U/mg protein）

1.1 产品特征：

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   蛋白纯度：≥80%（biuret），色谱纯化

3）   比活力：≥2000Kunit Units/mg protein

4）   活力定义：25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

5）   激活剂：多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

6）   抑制剂：β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白；并没有特异性抑制DNase I酶活的通用抑制剂，比如柠檬酸盐抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影响Mn2+激活的DNase I。

7）   溶解性：溶于0.15M NaCl（5mg/ml），无色透明溶液

1.2 订购信息：产品性能媲美Sigma D5025，本品生产至少十年以上，销售到国内各大实验室，欢迎各大工业和科研用户前来咨询。电话：021-54736159，QQ：2971634497。

二、脱氧核糖核酸酶I（DNase I）（冻干粉形式，比活力≥500 Kunit U/mg protein）

2.1 产品特征：

8）   CAS NO：9003-98-9

9）   分子量：~31 kDa

10）同义名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脱氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水解酶，脱氧核糖核酸酶A

11）  比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

12）  活力定义：在50μl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反应缓冲体系中，37℃，10min内完全降解1μg λ-DNA所需的酶量即为一个活力单位。此反应条件下得到的一个单位DNase活力约等于一个Kuntiz unit。

13）  激活剂：多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

14）  抑制剂：EGTA，EDTA，盐离子浓度（＞100mM）都能降低DNase活性

15）  热失活：含终止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）内65℃，处理10min

16）  溶解性：溶于缓冲液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

2.2 订购信息：产品性能媲美Sigma DN25。比活低于MF0401（≥2,000 Kunit U/mg protein），价格更加经济。欢迎咨询，电话：021-54736159，QQ：2971634497。

三、脱氧核糖核酸酶I（DNase I）（即用型溶液）

3.1 产品特征：

试剂盒形式提供，其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供，酶经过严格质控能极好的消化模板；还提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution，节省了试剂配制的时间，用起来更加快捷。

3.2 试剂盒包装：

3.3 使用方法【以RT-PCR反应前RNA样本内DNA污染的去除为例】

1）DNA模板经核酸内切酶线性化，用酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量无菌去离子水中。

2）往一个RNase-free EP管内依次加入下列试剂：

【注意】：如果需要处理较大量的RNA样品，可按比例放大上述反应体系。条件许可下最好往体系内加入适量RNase抑制剂（货号：MF0218-2KU）以防止RNA降解。

3）   37℃孵育30min。

4） 往上述体系内加入1μl 10× Stop Solution使其终浓度为1×，混匀。之后65℃孵育10min使DNase I失活?！咀⒁狻浚阂欢ㄒ燃尤?0× Stop Solution，然后再加热失活RNase I，否则先加热可能引起RNA被降解。

5）加热处理后的RNA样品即可直接用作RT-PCR反应用的模板。

3.4  订购信息：即用型试剂盒，科研单位且用量不多用户的首选?；队裳?，电话：021-54736159，QQ：2971634497。

相关产品

货号	名称	规格
MF0402-10MG	Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein	10MG
MF0401-15KU	Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein	15KU
MF0405-200U	DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脱氧核糖核酸酶I溶液	200U
MF0203-100MG	Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas	100mg
MP1509-25KU	Benzonase Nuclease 全能核酸酶	25KU
MF0201-100MG	Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K	100mg
MF0218-2KU	RNase Inhibitor (40U/μl), Murine小鼠RNA酶抑制剂	2KU
MF0404-500ML	DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水（无DNase、RNase )	500ml

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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