核酸/蛋白提取重要工具酶：

脱氧核糖核酸酶I，核糖核酸酶A，全能核酸酶

（DNase I，RNase A，Benzonase）

搜索关键词：

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），Sigma D5025，核糖核酸酶A（RNase A）,全能核酸酶（Benzonase）,Merck 70746-3；CAS：9001-99-4；蛋白酶K（Protease K）；

背景需求：

分子生物学实验中，要想研究核酸（DNA, RNA）的各种功能、表达和群落分布等相关研究，首先要做的第一步就是核酸制备。核酸制备的第一步就是细胞内含物（细胞核，细胞浆）的释放，由于DNA和RNA经?；崃呀獾墓讨泄餐头懦隼?，不管采用任何强烈程度的提取液都无法避免两者的干扰，为此，需要采用特异性的酶来去除干扰，保证任一核酸类型的纯度。要提取高质量的DNA，需要用RNase A来消化样品中残留的RNA；要提取高质量的RNA，需要用DNase I来消化样品中残留的基因组DNA等。

蛋白研究中，尤其是重组蛋白（比如生物制品重组单克隆抗体，重组功能蛋白，甚至是疫苗）的制备中，对蛋白的纯度要求很高，而蛋白提取的第一步同样是对细胞内含物的释放，此时随着而来的问题就是要尽量去除核酸的干扰，此时既有DNA又有RNA的干扰，传统方法选择DNase+RNase组合的酶消化或超声方法来破坏RNA，这两种方法都存在不少的缺点，而全能核酸酶（Benzonase）的出现，让这一步变得很简单。一种酶即可轻松去除任何核酸类型的干扰。

我司（懋康MKBio）生物根据科研工作者和工业用户的需求，生产和供应几种应用率很高的酶制品，产品品质高，且能有大规格供应，欢迎咨询。

Part 1. 脱氧核糖核酸酶I (DNase I, CAS：9003-98-9)

常见同义名：

DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A脱氧核糖核酸5′-寡核苷酸水解酶，脱氧核糖核酸酶A

CAS NO.：9003-98-9

来源：牛胰腺Bovine Pancreas

分子量：~31kDa

特异性（目的）：水解多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）

基本描述：

脱氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I），在大多数细胞和组织中都能发现的一种核酸内切酶，偏好切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸（见下图反应流程图1），平均消化产物最小为多聚四核苷酸。Mg2+存在条件下，DNase I可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在条件下，DNase I识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。

图1. 脱氧核酸糖酸酶I(DNase I)作用机理图

主要应用：

• 制备不含DNA的RNA样本；

• RT-PCR反应前RNA样本内基因组DNA等可能存在DNA污染的去除；

• T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的体外RNA转录后DNA模板的去除；

• DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白质相互作用；

• 缺口平移法标记探针用；

• 制备随机DNA片段文库；

• TUNEL细胞凋亡检测中用于剪切DNA制备阳性对照；

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【温馨提示】：见我司懋康生物整理的Deoxyribonuclease I (DNase I)脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺产品专题。

Part 2. 蛋白酶K (Proteinase K, CAS：39450-01-6)

常见同义名：

Proteinase K (from Tritirachium album)蛋白酶K（林伯氏白色念球菌）；Endopeptidase K肽链内切酶K；

CAS NO.：39450-01-6

来源：基因来源林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)，酵母重组表达

分子量：~29.3kDa

特异性（目的）：切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品内蛋白质的降解，常用于核酸制品中核酸酶（Nuclease）的去除，能降解天然蛋白和变性蛋白。

基本描述：

蛋白酶K（Proteinase K），一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，pH 4-12的宽广范围内均有活性，SDS、尿素或EDTA存在条件下也很稳定。相对分子量约29.3kDa，能够切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品内蛋白质的降解。对天然和变性蛋白都表现出广谱的切割特异性，广泛用于DNA和RNA的纯化实验。

主要应用：

• 对酵母菌、细菌、组织裂解液或哺乳动物细胞裂解液中污染蛋白的降解来改善核酸的提取质量和产量；

• 对样本材料内酶比如DNase，RNase的失活来改善高分子量核酸的提取质量和产量；

• 膜结合蛋白定位和定向用的拓扑探针；

• 改善PCR克隆效率；

• 核酸酶?；な笛橹惺Щ蠲富旌衔?；

• 去除结合到阳离子蛋白如溶菌酶和核酸酶A上的内毒素；

• 对石蜡包埋组织的处理以暴露抗原表位用于抗体标记用；

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Part 3. 核糖核酸酶A (RNase A, CAS：9001-99-4)

常见同义名：

Ribonuclease I核糖核酸酶I；Pancreatic Ribonuclease胰腺核酸酶；Endoribonuclease I内源核糖核酸酶I；Ribonucleate 3′-pyrimidinooligonucleotidohydrolase核糖核酸3′-嘧啶寡核苷酸水解酶；

CAS NO.：9001-99-4

来源：Bovine Pancreas牛胰腺

分子量：~13.7kDa

特异性（目的）：低盐浓度（0-100mM NaCl），可切割单链RNA，双链RNA，以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。高盐浓度（≥0.3M），RNase A仅特异性切割单链RNA。

基本描述：

核糖核酸酶A，英文名Ribonuclease A，缩写RNase A，CAS NO：9001-99-4，一种核糖核酸内切酶（endoribonuclease），特异性识别嘧啶类核苷酸3’-核糖磷酸基团（作用机理见图2），如序列pG-pG-pC-pA-pG经切割产生pG-pG-pCp和A-PG，当切割单链RNA时活性最高，推荐工作浓度为1-100μg/ml，兼容于各种反应体系。低盐浓度（0-100mM NaCl），可切割单链RNA，双链RNA，以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。高盐浓度（≥0.3M），RNase A仅特异性切割单链RNA。RNase A不会水解DNA，因DNA缺少形成环形中间体必需的2’-OH。

主要应用：

• RNase?；な笛椋≧Nase protection assays）；

• 去除非特异性的结合RNA（bound RNA）；

• RNA序列分析；

• 蛋白样品中含有的RNA污染降解；

• DNA纯化；

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【备注】：核糖核酸酶H (RNase H)：特异性分解RNA-DNA杂交体中的RNA链的一种核糖核酸内切酶，不能消化单链或双链DNA。

Part 4. 全能核酸酶/广谱核酸酶 (Benzonase, CAS：9025-65-4)

常见同义名：

Benzonase endonuclease；Benzonase Nuclease；BenzNuclease; Universal Nuclease; Turbonuclease;全能核酸酶；广谱核酸酶；

CAS NO.：9025-65-4

来源：基因来自粘质沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又称为灵杆菌）；酵母重组表达；

分子量：~27.9kDa

特异性（目的）：可以切割和降解各种形式的DNA和RNA（单链，双链，线性，环状，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段，并且在很多种操作条件下有效。

基本描述：

Benzonase，中文名全能核酸酶，或广谱核酸酶，一种源于粘质沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又称为灵杆菌）的非特异性核酸内切酶，由两个完全一样的亚基构成，每个亚基大约30kDa，含有245个氨基酸和两个必需的二硫键?？梢郧懈詈徒到飧髦中问降腄NA和RNA（单链，双链，线性，环状，或超螺旋形式），生成含有5’-磷酸末端的3-5个寡核苷酸残基片段，并且在很多种操作条件下有效（反应机制见图3）。对核酸碱基序列无特异性要求，可在链内任意核苷酸间进行切割，广泛用于去除生物制品中的核酸。

主要应用：

• 科研研究中，作为培养细胞上清和细胞裂解液去粘度的首选酶制剂，去除核酸干扰提高后续蛋白纯化或功能研究；

• 用在生化分析样品制备——ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程，使用本品benonase处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，以及提高回收率。

• 疫苗工业、蛋白和多糖类制药工业，去除宿主核酸残留，使得疫苗和蛋白类核酸污染显著降低至皮克级别，提供生物功效。

• 防止细胞凝聚（Cell clumping），特别是融化冻存的细胞样品时；

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【温馨提示】具体信息见懋康网站全能核酸酶精品介绍（含常见问题和使用方法）。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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