活性氧（reactive oxygen species, ROS）荧光探针系列之：
CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化应激检测试剂
背景需求：
氧化应激是由于反应性活性氧物质ROS产生和细胞清除ROS的不平衡导致的，ROS与核酸、蛋白质和脂质反应导致细胞和组织损伤。ROS的过多累积往往引起某些疾病的发生，包括炎症、动脉粥样硬化、衰老以及衰老相关的退行性疾病等。为此，ROS产生及其治病机理的研究越来越受到科学家的关注。
基本介绍：
CellROX氧化应激试剂（CellROX Oxidative Stress Reagents）是专门设计用来可靠检测活细胞内活性氧ROS的一系列荧光探针。这些细胞膜渗透性的试剂当处于还原态时无荧光或极弱荧光，一旦被氧化后发出强荧光。
Thermo Fisher (Invitrogen)提供三种CellROX氧化应激试剂，CellROX Green Reagent是一种DNA染料，一旦氧化后与DNA结合，因此，信号主要定位在细胞核和线粒体。相反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的荧光信号定位在细胞质。CellROX氧化应激试剂产生的荧光皆可用传统的荧光显微镜、高内涵筛选仪器（HCS）、流式细胞仪、荧光酶标仪或高通量筛?。℉TS）?；褂敫髦痔ㄊ揭瞧骷嫒?，比如FLoid?，Tali?，和Attune?仪器。
产品优势：
CellROX氧化应激试剂（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下优势：
◇ 染色流程非常简单（见Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程图），试剂直接加入完全培养基或缓冲液内的细胞。
◇ 与传统的ROS检测探针相比，光稳定性非常好。另外，某些CellROX氧化应激试剂经后期的甲醛固定和去污剂透化处理后，仍维持良好的荧光信号（见Table 1. ROS检测方法的比较表）。
|
|
CellROX Deep Red Reagent |
CellROX Orange Reagent |
CellROX Green Reagent |
DCFH-DA |
DHE |
|
Readout |
CellROX探针本身是还原态，无荧光，一旦氧化后发亮绿色、橘色或深红色荧光。CellROX具细胞膜渗透性，能轻松加载进入活细胞。 |
本身无荧光，氧化后发强绿色荧光。具细胞膜渗透性。 |
本身蓝色荧光，进入细胞氧化后，与DNA结合生成红色荧光。 |
||
|
Common filter set |
Cy5 |
RFP |
FITC |
FITC |
Suitable filter |
|
Ex/Em (nm) |
640/665 |
545/565 |
485/520 |
504/529 |
518/606 |
|
Live cell–compatible |
Yes |
Yes |
Yes |
Yes |
Yes |
|
Labeling in complete medium |
Yes |
Yes |
Yes |
No |
Yes |
|
Formaldehyde-fixable |
Yes |
No |
Yes |
No |
No |
|
Detergent-resistant |
No |
No |
Yes |
No |
No |
|
Compatible platforms |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer *Floid cell imaging station *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Floid cell imaging station |
*Imaging *HCS |
◇ 通过对内皮细胞维生素K3诱导的ROS生成的抑制实验，发现CellROX氧化应激试剂特异性检测ROS（见Fig 2 基于CellROX氧化应激试剂定量和统计分析氧化应激水平）。
A）CellROX Green Reagent. 在MatTek激光共聚焦专用玻底培养皿内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含维生素K3（100μM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。向某些对照和维生素K3处理孔内加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50μM）。之后细胞用CellROX Green Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置显微镜下检测（40X物镜）。N-乙酰半胱氨酸处理抑制TBHP诱导生成的ROS，证实CellROX检测到的荧光信号来自化合物诱导产生的ROS。
B）CellROX Orange Reagent. 在96孔板内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含TBHP（200μM）或不含TBHP的培养基37℃处理2h。向某些对照和TBHP处理孔内加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10μM）。之后细胞用CellROX Orange Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP诱导产生的ROS，证明CellROX检测到的荧光信号来自化合物诱导产生的ROS。
C）CellROX Deep Red Reagent. 在96孔板内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含维生素K3（100μM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。在孵育的后30min向某些对照和维生素K3处理孔内加入超氧化物清除剂MnTBAP（100μM）。之后细胞用CellROX Deep Red Reagent（5μM）和Hoechst 33342染色，加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。
◇ CellROX氧化应激试剂能偶与其他细胞活力检测探针联合检测，是一种非常有用的多重荧光方法来测定大量的细胞现象（见Fig 3 人U2-OS细胞的氧化应激检测）。
Fig 3. 表达Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤细胞（U2-OS）用维生素K3(Menadione, 100μM)处理1h。之后用CellROX Green Reagent（5μM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。细胞清洗后置于活细胞成像液内检测。
CellROX订购信息：以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装正品，原始包装为10x50 μg（10支50μg单个包装构成）。我司对C10444、C10422进行拆开销售，特惠价为2180元/支，单支50μl，现货销售，欢迎订购。
|
货号 |
产品名称 |
规格 |
报价（元） |
小包装供货 |
|
5 x 50 uL |
7156 |
是（50 μl） |
||
|
C10443 |
CellROX Orange Reagent 氧化应激探针（橙色） |
5 x 50 uL |
7214 |
否（50 μl） |
|
5 x 50 uL |
7175 |
是（50 μl） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
